两种DNA定量方法的比较：光吸收和荧光

对微量的双链 DNA 进行定量在各种生物学应用中都显得非常重要，包括标准的分子生物学技术中的应用，例如 cDNA 文库的建立；用于亚克隆的 DNA 片段的纯化；诊断技术中的应用，例如定量 DNA 扩增产物，在药物研究中测定 DNA 分子。

 

最常用的检测核酸浓度的方法就是检测核酸在 260nm （ A260 ）处的光吸收。这一方法最主要的缺点就是单链核苷酸和单核苷酸会产生干扰信号。核酸样品中的杂质也会影响结果。光吸收不能区分 DNA 和 RNA, 灵敏度也相对较低（用 1cm 的比色杯在 A260 值为 0.1 时相对应的双链 DNA 浓度为 5 μ g/ml ）。 Hoechst 染料是一种非常灵敏的荧光染料。 H33258 选择性的与双链 DNA 结合。在有蛋白的情况下荧光信号并不显著增加，因此可检测和定量低至 10 ng/ml 的 DNA 。

 

分子探针中的 Cyanine 染料如 YO-PRO TM -1 和 YOYO-1 （ cyanine 单体和二聚体）能定量溶液中少至 0.5ng/ml 的 DNA 。另外一种常用的 DNA 探针， PicoGreen TM 可以直接定量 PCR 扩增产物而无需从反应混合物中纯化 DNA ，并且可以检测到 DNA 中少量的重组蛋白的污染 .Hoechst 33258 染料有明显的 AT 选择性 , 而 PicoGreen 试剂则很少有 AT 或 GC 选择性，因此能够对任何来源的 DNA 进行准确定量.

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