分光光度度计的详细解析

一，定义

　　分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

二，仪器组成

　　已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白

　　定量以及细菌生长浓度的定量。

　　仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

三，光谱范围

　　包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.

　　钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱光通过三棱镜折射后, 可得到由红橙,黄绿,蓝靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.

　　氢灯（或氘灯）的发射光谱:氢灯能发出185～400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源.

　　物质的吸收光谱(1)

　　如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.

　　不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质.

　　物质的吸收光谱(2)

　　当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液.

　　入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光

　　如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失则:

　　入射光 = 吸收光 十 透过光

 

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