【Z】如何防止组培过程中的褐化现象

褐变主要是由于细胞破碎，酚类与多酚氧化酶结合产生褐色的醌所致。
1.抗氧化酶系统主要有谷胱甘肽还原酶（GSH）、抗坏血酸（ASA）、维生素E（VE），类胡萝卜素（Car）、细胞色素f（Cytf）、氢醌和含硒化合物等，它们能清除自由基和活性氧，也可以作为抗氧化剂，对酚类物质的氧化起抑制作用。
2.温度过高使PPO的活性提高，从而加速培养的组织褐化。
3. 抗坏血酸为还原剂，能将氧化的醌还原为酚类物质，阻止醌类物质进一步自发聚合形成色素物质［7，10-12］。其衍生物异抗坏血酸也具有同样的抑制效果。 但是用抗坏血酸后会改变pH，所以应注意pH值的变化。另外，可以添加：DTT，半胱氨酸，硫代硫酸钠等还原性物质。半胱氨酸可通过与PPO活性位点的铜 离子不可逆结合而抑制酶活性，或者替代PPO活性位点的组氨酸残基；三是半胱氨酸并非阻止PPO氧化酚类，而是阻止酚类的聚合。
4.继代时间应适当缩短，培养基中添加聚乙烯毗咯烷酮(PVP)和活性炭可以降低褐化。外植体大小要合适。培养外植体材料的年龄，一般幼嫩材料的褐化轻。
5.蜂蜜中含有如生育酚、抗坏血酸、类黄酮、酚类物质及一些酶等抗氧化成分而抑制褐变。
6. 有人在配母液时，微量中不要加硫酸铜，氯化钙减半，酚类氧化酶的辅酶是铜离子为主，少量是其它的2价离子，可以防止褐化。但也有人实验，在添加5 umol/l的硫酸铜，有利于早熟禾胚性愈伤组织的诱导。而且也有研究证明在培养基中添加1 μmol/L CuSO4或10 μmol/L AgNO3有助于小麦成熟胚愈伤组织的诱导及分化。
7.弱光下培养的材料，褐化一般较轻。
8.消毒时间应尽量减少
9.降低无机盐浓度能减轻褐化现象，降低褐化率
10.BA浓度的提高褐化重。
11.将核桃、巨按、苹果在5℃下进行低温预处理一段时间有助于减轻褐化。